FINALIDADE
Enzimaimunoensaio (Elisa) para determinação qualitativa do antígeno p24, anticorpos específicos anti-HIV1, HIV2 e subtipo “O” em amostras de sangue seco coletada em papel filtro.
PRINCÍPIO DO MÉTODO
Amostras de sangue seco em papel filtro (S&S 903) são eluídas na microplaca que esta revestida com proteínas recombinantes do HIV 1, HIV 2, subtipo O do HIV 1 e um anticorpo anti-p24. Durante a primeira incubação, os anticorpos anti-HIV e o antígeno p24, quando presentes na amostra, ligam-se às proteínas recombinantes impregnadas na microplaca, formando uma interação antígeno-anticorpo. Após a lavagem da placa o material não ligado é retirado. Em uma segunda incubação, os conjugados (1 e 2), marcado com peroxidase são adicionados, ligando-se aos anticorpos anti-HIV e ao antígeno p24 fixados na placa. O material não ligado é novamente retirado, adicionando-se posteriormente o cromógeno/substrato, que irá reagir nos poços onde a enzima peroxidase estiver presente, indicando a presença de anticorpos anti– HIV. A reação é parada com a adição de um reagente ácido, e a leitura das densidades óticas é realizada em filtro de 450 nm, utilizando o filtro de 620 nm como referência. A concentração de anticorpos anti-HIV é diretamente proporcional à intensidade da cor desenvolvida na reação.
ARMAZENAMENTO, TRANSPORTE E VALIDADE
A data de validade está descrita no rótulo de cada reagente. A validade do kit refere-se ao reagente com a menor data de validade. Não usar reagentes cuja data de validade tenha expirado. Todos os reagentes devem ser mantidos sob refrigeração na faixa entre 2 a 8ºC. Os reagentes poderão ser transportados por até 48 horas entre 15-25 ºC, sem que isso afete a qualidade do mesmo. Manter o kit ao abrigo da luz e da umidade. Os reagentes devem permanecer fora do refrigerador somente o tempo necessário para as dosagens, não congelar os reagentes.
